常用培养基配方：1l蒸馏水+20g---+15g蛋白胨+5g---+0.5g---+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株t4412、tt2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(cm)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 ml 菌液转接入装有20 ml 液体完全培养基的250 ml 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，地衣芽孢杆菌采购，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/ml 青，使其终浓度为0.3 u/ml，继续振荡培养2 h。 2. 收集细胞 各取菌液10 ml，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 ml smm 中，每ml 约含108～109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液0.5 ml，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1ml(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取5 ml 菌悬液，地衣芽孢杆菌，加入5 ml 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/ml，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，地衣芽孢杆菌制造商，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 ml 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取0.5 ml 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 ml，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。
地衣芽孢杆菌 芽孢杆菌科---革兰氏染色性；为革兰氏阳性杆菌细胞大小：0.6～0.8×1.5～3.0微米细胞形态及特点：细胞形态和排列呈杆状、单生。细胞内无聚-β-盐（phb）颗粒芽孢形态：产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊稍膨大 菌落：菌落粗糙，不透明，粘着，扩展。明胶液化，地衣芽孢杆菌，淀粉水解，v.p.试验阳性，柠檬酸盐利用。培养特性：在肉汁培养基上的菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h后菌落直径为3mm 培 养 基：nutrient agar （营养肉汁琼脂）：蛋白胨5 g，--- 30 g，nacl 5 g，琼脂 15 g，蒸馏水 1l ，调ph 7.0-7.2。生化形状：本菌有动力。
农业肥料
a、---土壤微生态环境：使用后，土壤中的优势种群稳定的保持优势---。
b、减轻病害、降低残留：有效菌施入土壤后，迅速繁殖100倍成为优势菌，控制了根际的营养和其他资源，致使病源菌在相当程度上丧失生存空间和条件；使植物有关组织细胞壁增厚、纤维化、木质化程度提高，并在表皮层外形成角质双硅层，形成一道阻止病菌侵袭的屏障。
c、提高肥效：固氮菌克提高氮的供应，解磷、解钾菌可有效提高土壤中磷和钾的吸收率。
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